Analysis of proteidn-carbohydrate interactions by a combination of calorimetry, X-ray crystallography and site-directed mutagenesis

Project Details

Description

Het expressiesysteem voor het zaadlectine DBL van professor Etzler werd gebruikt om het recombinante lectine te produceren in hoeveelheden van enkele milligrammen. Twee verschillende xpressievectoren en een aantal verschilende gastheerstammen werden geëvalueerd. Uiteindelijk werd gekozen voor het pET-8C plasmide en de 'BL21 CodonPlus' stam van Escherichia coli. Deze stam heeft een aangepast codongebruik en is bijzonder geschikt voor de expressie van planteneiwitten. Met systeem kunnen enkele milligrammen zuiver lectine per liter cultuurmedium geproduceerd worden. Een bestaand protocol voor de zuivering van DBL werd geëvalueerd en aangepast aan de beschikbare apparatuur en nieuwe technieken. De zuivering gebeurt op bais van de globale fysicochemische eigenschappen van het eiwit en is onafhankelijk van de specifieke suikerbindings-activiteit. Dit protocolzou daarom eenvoudig aan te passen moeten zijn voor andere lectines, zoals UEA-II en de geplande mutanten van deze eiwitten, waarvan de suikerspecificiteit onvoorspelbaar en eventueel afwezig kan zijn.
AcronymFWOTM131
StatusFinished
Effective start/end date1/10/9930/09/03

Keywords

  • biology

Flemish discipline codes

  • Biological sciences
  • Chemical sciences