Moleculair onderzoek bij patiënten met defecten in de complexen van de oxidatieve fosforylatie en het pyruvaat dehydrogenase complex.

mitochondriale aandoeningen zijn een heterogene groep van ziekten, gekenmerkt door defecten van de oxidatieve fosforylering (OXPHOS). Vijf multi-eiwit complexen, zowel gecodeerd door genen gelegen in het mtDNA als in het nucleair genoom, vormen dit OXPHOS systeem. Het systeem staat zelf onder duale genetische controle. Naast de structurele eiwitten zelf die de bouwstenen van de energie verstrekkende complexen uitmaken, zijn nog vele genen betrokken bij de vorming of assemblage van de subeenheden tot functionele gehelen. Het ligt dan ook in onze bedoeling om in samenwerking met collega's van UGent, en gebruik makend van de meest recente moleculaire technieken, de kennis evan de genmutaties die aan de basis liggen van ademhalingsketen defecten en hun klinische expressie te begrijpen of te vergoten. Hierbij zal veelvuldig gebruik gemaakt worden van rho zero celcomplemen-tatie, hetroplasmiestudie, BN-PAGE, immunocytologie, DHPLC, real time PCR, nucleotiden sequentie en proteoom analyse technieken om zowel het nucleair als het mtDNA van de betrokken patiënten te bestuderen. Bovendien zal met behulp van de gist S. cerevisiae als modelsysteem voor de studie van het OXPHOS systeem, en in het bijzonder de assemblage van complex V, de nadruk worden gelegd op meer fundamenteel onderzoekswerk. Er werd reeds aanvang gemaakt met de verdere functionele analyse van een humaan mutant ATP12 gen vanaf single en multicopy gist vectoren. In de jaren negentig werd in het laboratorium ook de nodige aandacht besteed aan de studie van de genen verantwoordelijk van de PDHc deficiëtie in humane patiënten. In een laatste luik van dit project zullen we dan ook opnieuw aansluiten bij deze traditie door in atiënten met een klinische en biochemische gedocumenteerde PDHc deficiëntie de betrokken proteïnen verder te bestuderen. Visualisatie van het subeenheid defect door middel ban BN-PAGE kan immers direct leiden naar identificatie van het onderliggende gendefect.