Functionele expressie van matrix-metalloproteïnases door in vitro geëxpandeerde mesenchymale stamcellen uit humaan beenmerg.

Scriptie/Masterproef: Master's Thesis

Samenvatting

MSC zijn ongedifferentieerde cellen uit het stromale beenmerg compartiment. Deze stamcellen kunnen differentiëren in uiteenlopende celtypes, van bot- tot neurale cellen. Momenteel worden therapeutische toepassingen van MSC in verschillende domeinen van de geneeskunde onderzocht. Over de homing van MSC is echter nog weinig gekend. Er zijn enkele studies verschenen die aantonen dat MSC kunnen homen naar verschillende weefsels, maar de moleculaire mechanismen die bij de extravasatie en homing van MSC betrokken zijn, blijven nog onbekend. Dit werk kadert in een ruimer project waarin getracht wordt de verschillende stappen van het extravasatieproces van MSC te ontrafelen. Meer in het bijzonder zijn we de migratiecapaciteit van in vitro geëxpandeerde MSC doorheen beenmergendotheel gaan onderzoeken. We hebben ook de eventuele rol van de proteasen MMP-2 en MMP-9 in dit proces onderzocht.In een eerste fase hebben we door fenotypering en differentiatieculturen bevestigd dat we MSC uit beenmerg konden kweken. We zijn erin geslaagd differentiatie in 3 mesenchymale cellijnen, nl. bot, vet en kraakbeen, te induceren. Ook het fenotype van onze in vitro geëxpandeerde cellen komt overeen met wat gekend is van de MSC. Daarenboven hebben we ook opgemerkt dat MSC uit laag confluente culturen kleiner zijn dan MSC gekweekt aan hoge confluentie.In een tweede fase werd het in vitro invasieve karakter van MSC onderzocht. Daarom hebben we invasietesten ingezet. MSC uit laag confluente culturen bleken beter te invaderen. Bovendien stelden we vast dat de aanwezigheid van een laag beenmerg endotheelcellen op de filter een positieve invloed had op de in vitro invasie van MSC. Met RT-PCR werd aangetoond dat MSC transcripten voor MMP-2, maar niet voor MMP-9, uitdrukken. Met zymografie werd aangetoond dat het enzym ook gesecreteerd wordt door de MSC en dus een actieve rol kan spelen in de invasie. Om een beter zicht te krijgen op de rol van MMP-2 bij invasie van MSC werden in een preliminaire fase invasietesten ingezet in aanwezigheid van een neutraliserend anti-MMP-2 antilichaam. Hierbij werd een gedaalde invasie in aanwezigheid van dit antilichaam waargenomen.Op basis van de resultaten beschreven in dit werk kunnen we besluiten dat MMP-2 uitgedrukt en actief gesecreteerd wordt door in vitro geëxpandeerde MSC. Preliminaire resultaten wijzen bovendien op een mogelijke functionele betrokkenheid van dit protease bij de invasie van MSC. Verder onderzoek is echter nodig om het complexe homingproces van de MSC te kunnen doorgronden.
Datum prijs2003
Originele taalEnglish
BegeleiderIvan Van Riet (Promotor) & Marc De Waele (Co-promotor)

Citeer dit

'